野生和組培苗紅大戟藥材HPLC圖譜初步比較
發(fā)布時間:2019-08-29 來源: 美文摘抄 點擊:
摘 要:為了比較野生苗和組培苗紅大戟藥材的化學成分,以2 年生紅大戟野生和組培植株的根為材料,進行HPLC圖譜初步分析。結果表明,野生苗和組培苗藥材在化學成分的類型、含量上均有明顯差異;種植生境和種苗來源可能是化學成分產生差異的主要原因。
關鍵詞:紅大戟 HPLC 指紋圖譜 化學成分
1 材料與方法
1.1 材料和儀器設備
紅大戟野生藥材采集于廣西寧明縣,生境為山坡灌木林,土質為疏松壤土。組培苗的原始材料亦來自廣西寧明縣,按黃浩等方法[1-3],經外植體無菌處理、擴繁、生根和移栽后,種植于廣西藥用植物園科研基地,種植地透光率為60 %的松樹林下,土質為疏松壤土。所用于實驗的藥材均為2 年生植株自然干燥的塊根。
美國VARIAN公司210型高效色譜儀,迪馬ODS C18色譜柱(4.6 mm ×250 mm,5μm),KQ-5200型數(shù)控超聲儀 (昆山市超聲儀器有限公司),電子分析天平(CP2250D,Sartorius),甲醇、乙腈為色譜純(美國Fisher公司),水為超純水。
1.2 方法
1.2.1 色譜條件
流動相為乙腈A-0.1 %磷酸溶液B(梯度變化0~70 min,A 8 %-70 % ),流速0.65 mL/min,檢測波長210 nm,進樣量10 μL,柱溫34℃。
1.2.2 樣品制備
將藥材打成粉,取粉末2.00 g,置于100 mL具磨口塞的錐形瓶中,精密加入80 %的甲醇溶液25.00 mL,搖勻,稱定重量。超聲處理1 h,放冷,再稱定重量,并用甲醇補足減失的重量,搖勻,吸取一定量,以0.45 μm的微孔濾膜過濾備測。
1.2.3 方法學考察
精密度試驗 取組培藥材制備的供試品溶液,連續(xù)進樣5次,結果表明,色譜圖中各色譜峰的相對保留時間的RSD小于1 %;相對峰面積的RSD小于1.5 %,符合指紋圖譜要求,表明儀器精密度良好。
穩(wěn)定性試驗 取組培藥材制備的供試品溶液,分別在0、1、2、6、12、24 h進樣測定,結果表明,各主要色譜峰的相對保留時間的RSD小于2 %,相對峰面積的RSD小于1 %,表明供試品溶液在24 h內穩(wěn)定。
重復性試驗 精密稱取組培藥材粉末2.00 g,共6份,照供試品溶液制備方法制備,進樣檢測,結果發(fā)現(xiàn)平行樣品間各色譜峰的相對保留時間的RSD小于1.5 %;相對峰面積的RSD小于1.5 %,表明方法的重復性良好。
2 結果與分析
HPLC圖譜結果見圖1。從紅大戟組培和野生的HPLC圖譜中可看出,組培苗和野生苗藥材間的圖譜存在明顯差別,說明其化學成分存在很大差別。在36.65 min時,組培苗藥材的HPLC圖譜中有一峰面積很大、但在野生藥材HPLC圖譜中并不存在的一種化學成分,即野生植物中不存在此成分。該化學成分是組培過程中少量基因發(fā)生變異造成還是生長過程中生物轉化為其他成分所致,需在下一步進行深入研究。在40~70 min的區(qū)間里,組培苗藥材只有3個特征峰,而野生藥材除了有相似的特征峰外,還有另外8個明顯的特征峰,這些特征峰代表的化學成分可能是在特定的生境中生長,通過生物途徑逐漸轉化而來。從HPLC圖譜中的峰高和峰面積可看出,野生和組培苗藥材的化學成分含量也存在很大的差異。
3 結論
野生苗由種子長出的苗,為有性繁殖,在化學成分上基本能保持與兩個親本相近;組培苗是通過生物技術的方法獲得種苗,屬于無性繁殖,理論上遺傳信息和化學成分原則上應與親本完全相同,也應與親本相同,但測試的結果表現(xiàn)出與野生植株在化學成分類型和含量上均有明顯差異,是否藥材來自不同來源的種苗,抑或是誘導過程中發(fā)生變異,還是不同生境或是用于實驗的塊根生長時間偏短(2 年)導致的差異,需進一步研究。
由此可見,藥用植株的化學成分類型、含量很可能與植物的生境、種苗來源以及種植時間有一定的關系。在人工栽培藥用植物時,應盡量模仿其野生生境,滿足其在生長過程中生理和化學合成的不同需要,使藥材的化學成分、含量與野生藥材相近。試驗結果可為其他藥用植物的人工栽培,特別是通過組織培養(yǎng)育苗的人工栽培提供參考。
參考文獻
[1] 黃浩. 藥用植物紅芽大戟組織培養(yǎng)的研究[D].廣西大學,2006.
[2] 黃浩,韋鵬霄,岑秀芬,等. 紅大戟組培苗移栽試驗[J]. 廣西熱帶農業(yè),2007(5): 19-21.
[3] 黃浩,文學,韋瑩,等. 藥用植物紅大戟快速繁殖技術研究[J]. 北方園藝,2011(4): 196-198.
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